Legislación › Orden de 31 de julio de 1979 por la que se establecen métodos oficiales de análisis de aceites y grasas, productos cárnicos, cereales y derivados fertilizantes, productos fitosanitarios, productos lácteos, piensos, aguas y productos derivados de la uva.
ANEJO IX
ANEJO IX
Métodos de análisis de productos derivados de la uva
VINOS
42. INVESTIGACIÓN DE DERIVADOS MONOHALOGENADOS DEL ÁCIDO ACÉTICO
42.1 Principio.
Extracción de los derivados monohalogenados del ácido acético con éter sulfúrico previamente acidificado. Formación de tioíndigo, de color rojo, que se extrae con cloroformo.
El método permite detectar de 1,5 a 2 mg/l de ácido monocloroacético y las cantidades correspondientes de otros derivados monohalogenados.
42.2 Material y aparatos.
42.2.1 Éter sulfúrico.
42.2.2 Ácido sulfúrico (1 + 4) (v/v).
42.2.3 Sulfato sódico anhidro desecado en estufa a 105 °C.
42.2.4 Hidróxido sódico 0,5 N.
42.2.5 Ácido tiosalicílico (2 mercaptobenzoico) al 3 por 100 (p/v) en NaOH 1,5 N.
42.2.6 Ferricianuro potásico al 2 por 100 (preparar inmediatamente antes de usar).
42.2.7 Cloroformo.
42.2.8 Baño de agua.
42.2.9 Estufa eléctrica.
42.2.10 Embudos de separación.
42.2.11 Cápsulas de porcelana 70-80 mm ∅.
42.2.12 Tubos de 150 x 15 mm con tapón esmerilado.
42.2.13 Tubos de 150 x 15 mm con llave inferior.
42.3 Procedimiento.
Introducir en un Erlenmeyer de 500 cc y boca esmerilada 100 ml de vino, 5 ml de ácido sulfúrico (1 + 5) y, agitando, 100 ml de éter sulfúrico, continuando en un agitador durante una hora. Separar en embudo de decantación y descartar la capa interior. Añadir 8-10 g de sulfato sódico anhidro al extracto éter, agitando vigorosamente. Verter el éter en otro embudo de 500 ml, agregando sucesivamente: 5,0, 2,5 y 2,5 ml de NaOH 0,5 N, agitando un minuto cada vez y reuniendo las tres capas inferiores alcalinas obtenidas en un tubo con tapón esmerilado, en el cual se habrá vertido previamente 1 ml de la solución de ácido tiosalicílico. Agitar enérgicamente durante treinta segundos y transferir el contenido del tubo a una cápsula de porcelana, evaporando durante una hora en baño de agua (90-100 ºC), tiempo que habrá de respetarse aun cuando el agua se evapore mucho antes.
Si se formara una costra sobre la superficie, es conveniente romperla con una varilla fina de vidrio, lo que facilitará la evaporación. Pasado este tiempo, llevar la cápsula con el residuo seco a la estufa mantenida a 200 °C durante treinta minutos exactamente, pasados los cuales se retira y se deja enfriar a la temperatura ambiente. Añadir 2 ml de agua destilada que disolverá la mayor parte del extracto y recoger en un tubo con llave en su parte inferior; agregar otros 2 ml de agua destilada para lavar la cápsula y, por último, 3 ml de solución de ferricianuro, recogiendo todo ello con los primeros, agitando bien el tubo durante treinta segundos para facilitar la oxidación. Conviene asegurarse de que todo el residuo se disolvió bien en los 4 ml de agua destilada antes de añadir la solución de ferricianuro. En presencia de un derivado monohalogenado se desarrollará una coloración rojo-anaranjado (apenas perceptible para contenidos inferiores a 0,1 mg). Agregar 3 ml de cloroformo; agitar alternativamente tres-cuatro veces y decantar. Si el extracto clorofórmico inferior se colorea de rojo-fucsia o rosado, indica la presencia de derivados monohalogenados del ácido acético.
42.4 Referencias.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.l.V.A 35h.
2. Cabezuco, Gorostiza y Garrido: Determinación de derivados monohalogenados del ácido acético. Instituto de Fermentaciones (1971, ATA, vol. II, núm. 1, páginas 145-151).
43. GRADO ALCOHÓLICO EN POTENCIA
43.1 Principio.
Es el volumen en litros de alcohol susceptible de obtenerse por fermentación total de los azúcares contenidos en 100 litros de vino.
43.2 Material y aparatos.
Como en 7(a).2 o 7(b).2.
43.3 Reactivos.
Como en 7(a).3 o 7(b).3.
43.4 Procedimiento.
Como en 7(a) o 7(b).
43.5 Cálculos.
Donde:
N = g/l de azúcares reductores de la muestra.
44. GRADO ALCOHÓLICO TOTAL
44.1 Principio.
Se considera el grado alcohólico total como la suma del grado alcohólico adquirido determinado según 5(a) o 5(b), y del grado alcohólico potencial, determinado según 43.
44.2 Cálculo.
Grado alcohólico total = Grado alcohólico adquirido + Grado alcohólico potencial.
7(c). AZÚCARES REDUCTORES
(Valoración)
7(c).1 Principio.
Eliminación de las materias reductoras distintas de los azúcares reductores por defecación, y posterior valoración basada en la acción reductora de los azúcares sobre una solución cupro-alcalina.
7(c).2 Material y aparatos.
7(c).2.1 Erlenmeyer de 300 ml con refrigerante de reflujo.
7(c).2.2 Material necesario para volumetría.
7(c).2.3 Baño de agua.
7(c).3 Reactivos.
7(c).3.1 Solución cupro-alcalina:
Disolver por separado: 25 g de sulfato de cobre puro (SO4Cu • 5H2O) en 100 ml de agua: 50 g de ácido cítrico en 300 ml de agua y 388 g de carbonato de sodio cristalizado en 300-400 ml de agua caliente. Mezclar la solución de ácido cítrico y la de carbonato de sodio. Añadir a continuación la solución de sulfato de cobre y completar el volumen con agua hasta un litro.
7(c).3.2 Solución de ioduro de potasio al 30 por 100. Conservar en frasco topacio.
7(c).3.3 Solución de ácido sulfúrico al 25 por 100 en volumen.
7(c).3.4 Solución de engrudo de almidón de 5 g/l; contendrá 200 g/l de cloruro de sodio para asegurar su conservación. Esta solución debe de ser mantenida diez minutos en ebullición en el momento de su preparación.
7(c).3.5 Tiosulfato de sodio N/10.
7(c).4 Procedimiento.
Poner en el Erlenmeyer de 300 ml, 25 ml de la solución cuproalcalina y 25 ml del vino previamente defecado según 7(a) o 7(b). Este volumen añadido no debe contener más de 60 mg de azúcares reductores.
Añadir algunos granos de piedra pómez y llevar a ebullición, que debe de ser alcanzada en dos minutos, adaptando el Erlenmeyer al refrigerante de reflujo y mantener exactamente durante diez minutos la ebullición.
Enfriar inmediatamente bajo corriente de agua fría. Añadir 10 ml de la solución de ioduro de potasio al 30 por 100, 25 ml de la solución de ácido sulfúrico al 25 por 100 y 2 ml de engrudo de almidón. A continuación, valorar con la solución 0,1 N de tiosulfato de sodio.
Efectuar una prueba en blanco, sustituyendo los 25 ml del vino previamente defecados por igual volumen de agua destilada y tratar como se ha indicado antes para la muestra.
7(c).5 Cálculos.
La cantidad de azúcar, expresada en azúcar invertido contenida en la muestra analizada, se obtiene en la tabla 7(c).1 en función del n' ‒ n de ml de tiosulfato utilizado.
Siendo:
n = Volumen, en ml, de solución de tiosulfato de sodio 0,1 N utilizado en la valoración de la muestra.
n' = Volumen, en ml, de solución de tiosulfato de sodio 0,1 N utilizado en la prueba en blanco.
Expresar el contenido del vino en g de azúcar invertido por litro, teniendo en cuenta las diluciones efectuadas en el curso de la defecación del volumen de la muestra analizada.
7(c).6 Referencias.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V. A 4e 29-31.
TABLA 7(c).1
Azúcares reductores, expresados en mg
| MI N/10 de tiosulfato de sodio | Primera cifra decimal | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | |
| 0 | 0,0 | 0,3 | 0,6 | 1,0 | 1,3 | 1,6 | 1,9 | 2,2 | 2,6 | 2,9 |
| 1 | 3,2 | 3,5 | 3,8 | 4,2 | 4,5 | 4,8 | 5,1 | 5,4 | 5,7 | 6,1 |
| 2 | 6,4 | 6,7 | 7,1 | 7,4 | 7,7 | 8,1 | 8,4 | 8,7 | 9,0 | 9,4 |
| 3 | 9,7 | 10,0 | 10,4 | 10,7 | 11,0 | 11,4 | 11,7 | 12,0 | 12,3 | 12,7 |
| 4 | 13,0 | 13,3 | 13,7 | 14,0 | 14,4 | 14,7 | 15,0 | 15,4 | 15,7 | 16,1 |
| 5 | 16,4 | 16,7 | 17,1 | 17,4 | 17,8 | 18,1 | 18,4 | 18,8 | 19,1 | 19,5 |
| 6 | 19,8 | 20,1 | 20,5 | 20,8 | 21,2 | 21,5 | 21,8 | 22,2 | 22,5 | 22,9 |
| 7 | 23,2 | 23,5 | 23,9 | 24,2 | 24,6 | 24,9 | 25,2 | 25.6 | 25,9 | 26,3 |
| 8 | 26,6 | 26,9 | 27,3 | 27,6 | 28,0 | 28,3 | 28,6 | 29,0 | 29,3 | 29,7 |
| 9 | 30,0 | 30,3 | 30,7 | 31,0 | 31,3 | 31,7 | 32,0 | 32,4 | 32,7 | 33,0 |
| 10 | 33,4 | 33,7 | 34,1 | 34,4 | 34,8 | 35,1 | 35,4 | 35,8 | 36,1 | 36,5 |
| 11 | 36,8 | 37,2 | 37,5 | 37,8 | 39,2 | 38,6 | 38,9 | 39,3 | 39,6 | 40,0 |
| 12 | 40,3 | 40,7 | 41,0 | 41,4 | 41,7 | 42,1 | 42,4 | 42,8 | 43,1 | 43,5 |
| 13 | 43,8 | 44,2 | 44,5 | 44,9 | 45,2 | 45,6 | 45,9 | 46,3 | 46,6 | 47,0 |
| 14 | 47,3 | 47,7 | 48,0 | 48,4 | 48.7 | 49,1 | 49,4 | 49,8 | 50,1 | 50,5 |
| 15 | 50,8 | 51,2 | 51,5 | 51,9 | 52,2 | 52,6 | 52,9 | 53,3 | 53,6 | 54,0 |
| 16 | 54,3 | 54,7 | 55,0 | 55,4 | 55,8 | 56,2 | 56,5 | 56,9 | 57,3 | 57,6 |
| 17 | 58,0 | 58,4 | 58,8 | 59,1 | 59,5 | 59,9 | 60,3 | 60,7 | 61,0 | 61,4 |
| 18 | 61,8 | 62,2 | 62,5 | 62,9 | 63,3 | 63.7 | 64,0 | 64,4 | 64,8 | 65,1 |
| 19 | 65,5 | 65,9 | 66,3 | 66,7 | 67,1 | 67.5 | 67,8 | 68,2 | 68,6 | 69,0 |
| 20 | 69,4 | 69,8 | 70,2 | 70,6 | 71,0 | 71,4 | 71,7 | 72,1 | 72,5 | 72,9 |
| 21 | 73,3 | 73,7 | 74,1 | 74,5 | 74,9 | 75,3 | 75,6 | 76,0 | 76.4 | 76,8 |
| 22 | 77,2 | 77,6 | 78,0 | 78,4 | 78,8 | 79,2 | 79,6 | 80.0 | 80,4 | 80,8 |
| 23 | 81,2 | 81,6 | 82,0 | 82,4 | 82,8 | 83,2 | 83,6 | 84,0 | 84,4 | 84,8 |
| 24 | 85,2 | 85,6 | 86,0 | 86,4 | 86,8 | 87,2 | 87,6 | 88,0 | 88,4 | 88,8 |
| 25 | 89,2 | 89,6 | 90,0 | 90,4 | 90,8 | 91,2 | 91,6 | 92,0 | 92,4 | 92,8 |
30. CLORUROS
30.1 Principio.
Determinación directa de cloruros por potenciometría utilizando el electrodo Ag/AgCl.
30.2 Material y aparatos.
30.2.1 pH-metro con escala que permita apreciar 2 mV.
30.2.2 Agitador magnético.
30.2.3 Electrodo Ag/AgCl, con una solución saturada de nitrato de potasio como electrólito.
30.2.4 Microbureta graduada en 1/100 de ml.
30.3 Reactivos.
30.3.1 Solución patrón de cloruros.‒Disolver 2,1027 g de cloruro de potasio puro para análisis (máximo 0,005 por 100 de bromo previamente desecado, en agua destilada hasta 1 litro. 1 ml de esta solución contiene 1 mg de ion cloro.
30.3.2 Solución de nitrato de plata.‒Disolver 4,7912 g de nitrato de plata en una solución alcohólica al 10 por 100 (v/v) hasta 1 litro, 1 ml de esta solución corresponde a 1 mg de ion cloro.
30.3.3 Ácido nítrico concentrado (d = 1,40).
30.4 Procedimiento.
30.4.1 Determinación del potencial del punto de equivalencia.
Introducir 5,0 ml de la solución patrón de cloruros en un vaso de 150 ml. Diluir aproximadamente a 100 ml con agua destilada y acidificar con 10 ml de ácido nítrico (30.3.3). Introducir los electrodos. Añadir 10 ml de la solución de nitrato de plata, agitando moderadamente: adicionar los cuatro primeros mililitros en fracciones de 1 ml y leer las correspondientes lecturas en milivoltios; los dos siguientes mililitros, en fracciones de 0,2 ml y continuar adicionando en fracciones de 1 mililitro hasta que se hayan alcanzado un total de 10 ml. Después de cada adición esperar unos treinta segundos antes de hacer la correspondiente lectura en milivoltios. Llevar los valores así obtenidos sobre un papel milimetrado en función de los correspondientes mililitros de solución de nitrato de plata y a partir del punto singular de la curva obtenida determinar el potencial del punto de equivalencia.
Para comprobar el potencial del punto de equivalencia, llevar a un vaso de 150 ml 5,0 ml de la solución patrón de cloruros, 95 ml de agua destilada y 1 ml de ácido nítrico concentrado. Introducir el electrodo y valorar agitando, justamente hasta el potencial del punto de equivalencia.
Repetir esta operación hasta obtener una buena concordancia de resultados. Este control debe efectuarse antes de determinar la concentración de cloruros en cada serie de muestras a analizar.
30.4.2 Determinación.
Llevar a un vaso de 150 ml 50,0 ml de vino. Añadir 50 ml de agua destilada y 1,0 ml de ácido nítrico concentrado. Valorar a continuación siguiendo el procedimiento descrito anteriormente hasta alcanzar el potencial del punto de equivalencia.
30.5 Cálculos.
La cantidad de cloruros se determina mediante las expresiones:
0,02 n en gramos de ion cloro.
0,5633 n en miliequivalentes por litro de ion cloro.
0,0329 n en gramos de cloruro sódico por litro.
Siendo:
n = volumen, en ml, de solución de nitrato de plata necesario para alcanzar el potencial del punto de equivalencia.
30.6 Referencia.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A 15j.
45. COLORANTES SINTÉTICOS
45.1 Principio.
Concentración mediante ebullición, extracción con éter y fijación de colorantes sintéticos básicos y ácidos sobre lana y posterior confirmación por cromatografía en papel.
45.2 Material y aparatos.
45.2.1 Hebras de lana blanca previamente desengrasadas con éter.
45.2.2 Hebras de lana blanca mordentadas. Disolver 1 g de sulfato de aluminio cristalizado y 1,2 g de tartrato ácido de potasio en 500 ml de agua. Introducir en esta solución 10 g de hebras de lana blanca, previamente desengrasadas con éter y secas, agitar durante una hora y dejar reposar de dos a tres horas; transcurrido dicho tiempo, secar a temperatura ambiente.
45.2.3 Papel para cromatografía Whatman número 1 o similar.
45.2.4 Erlenmeyer de 50 ml de capacidad.
45.2.5 Ampolla de decantación de 200 ml de capacidad.
45.3 Reactivos.
45.3.1 Éter sulfúrico.
45.3.2 Hidróxido de sodio al 5 por 100.
45.3.3 Ácido acético glacial, d = 1,05.
45.3.4 Ácido acético diluido, 1/18 (v/v).
45.3.5 Ácido clorhídrico diluido 1/10 (v/v).
45.3.6 Amoníaco puro, d = 0,92.
45.3.7 Solvente número 1 para cromatografía de colorantes de carácter básico:
Butanol n: 50 ml.
Etanol: 25 ml.
Ácido acético glacial: 10 ml.
Agua destilada: 25 ml.
45.3.8 Solvente número 2 para la cromatografía de colorantes de carácter ácido:
Butanol n: 50 ml.
Etanol: 25 ml.
Amoníaco puro: 10 ml
Agua destilada: 25 ml.
45.4 Procedimiento.
45.4.1 Determinación de colorantes de carácter básico.
Poner 200 ml de vino en un Erlenmeyer de 500 ml y llevar a ebullición hasta que el vino se reduzca a un tercio de su volumen. Enfriar y neutralizar con la solución de hidróxido sódico al 5 por 100 hasta claro viraje del color natural del vino. Extraer dos veces, con 30 ml de éter cada vez, y juntar las dos fases etéreas; en ellas se encuentran eventualmente los colorantes básicos; el residuo de la extracción debe ser conservado con objeto de investigar los colorantes ácidos. Lavar dos veces el éter empleado en la extracción con 5 ml de agua, con el objeto de eliminar el hidróxido sódico; a continuación, añadir 5 ml de ácido acético diluido a la fase etérea; la presencia de un colorante básico colorea la fase ácido-acuosa; la presencia de este colorante puede confirmarse por su fijación sobre lana mordentada.
La fase ácido-acuosa obtenida se alcaliniza con amoníaco al 5 por 100; añadir 0,5 g de lana mordentada y llevar a ebullición durante un minuto; aclarar la lana bajo el chorro de agua fría; de permanecer coloreada, el vino contiene un colorante básico.
45.4.1.1 Caracterización por cromatografía de papel. A partir de la fase acético-acuosa que contiene el colorante básico, concentrar hasta 0,5 ml. Si el colorante ha sido fijado sobre lana, añadir a ésta 10 ml de agua destilada, 10 gotas de ácido acético y llevar a ebullición, y una vez retirada la lana previamente escurrida, concentrar la solución hasta 0,5 ml.
Depositar sobre papel de cromatografía 20 microlitros de la anterior solución concentrada a 3 cm del borde lateral y a 2 cm del borde inferior. Introducir dicho papel en una cubeta que contenga el solvente 45.3.7 de forma que su borde inferior esté sumergido en el solvente 1 cm. Retirar y dejar secar al aire cuando se haya alcanzado una altura del frente del solvente comprendido entre 20 o 25 cm. Identificar el colorante por medio de soluciones de colorantes sintéticos básicos depositados simultáneamente sobre el cromatograma.
45.4.2 Determinación de colorantes de carácter ácido.
Partir del residuo de vino concentrado a un tercio y neutralizado después de su extracción con éter; si no se realizó la determinación de colorante de carácter básico, poner 200 ml de vino en un Erlenmeyer de 500 ml y llevar a ebullición hasta que el vino se reduzca a un tercio de su volumen. En uno u otro caso, añadir 3 ml de ácido clorhídrico diluido (45.3.5) y 0,5 g de lana blanca; hervir durante cinco minutos, decantar el líquido y lavar la lana con agua abundante. En el Erlenmeyer que contiene la lana, añadir 100 ml de agua y 2 ml de ácido clorhídrico diluido (45.3.5); hervir durante cinco minutos, decantar el líquido ácido y repetir esta operación hasta que el líquido de lavado sea incoloro. Después de haber lavado bien la lana, para eliminar completamente el líquido ácido, añadir 50 ml de agua destilada y 10 gotas de amoníaco puro; llevar a ebullición suave durante diez minutos a fin de disolver la materia colorante artificial que eventualmente se haya fijado sobre la lana. A continuación, retirar la lana del Erlenmeyer, llevar el volumen de líquido a 100 ml y hervir hasta evaporación completa del amoníaco; una vez conseguida dicha evaporación, añadir 2 ml de ácido clorhídrico diluido (45.3.5) (comprobar que el líquido haya adquirido reacción francamente ácida, llevando una gota de éste sobre el papel indicador). Poner en el Erlenmeyer 60 mg de lana blanca y llevar a ebullición durante cinco minutos; retirar la lana y aclararla bajo el chorro de agua fría. Si después de esta operación la lana toma coloración roja, cuando se trata de vino tinto, o amarilla, si se trata de vino blanco, confirma la presencia de materia colorante orgánica artificial de naturaleza ácida. Si la coloración adquirida es débil o dudosa, repetir el tratamiento con amoníaco y hacer una segunda fijación sobre una hebra de lana de 30 mg. Si transcurrida esta segunda fijación se obtiene una coloración rosa, aunque sea débil, se deduce la presencia de colorante ácido. Recurrir para un análisis más completo a nuevas fijaciones-eluciones (hasta 4 o 5), operando siempre de forma idéntica a la empleada para la segunda fijación hasta que se obtenga una coloración rosácea que, aunque sea pálida, no ofrece lugar a dudas.
45.4.2.1 Caracterización por cromatografía de papel.
Añadir sobre la hebra de lana coloreada 10 ml de agua destilada, lo gotas de amoníaco y llevar a ebullición; retirar la lana previamente escurrida y concentrar la solución amoniacal hasta 0,5 ml. Depositar sobre papel de cromatografía 20 microlitros de la anterior solución concentrada, a 3 cm del borde lateral y a 2 cm del borde inferior; introducir dicho papel en una cubeta que contenga el solvente 45.3.8 de forma que su borde inferior esté sumergido en el solvente l cm. Retirar y dejar secar al aire cuando se haya alcanzado una altura del frente del solvente comprendida entre 20 o 25 cm. Identificar el colorante por medio de soluciones de colorantes sintéticos ácidos depositados simultáneamente sobre el cromatograma.
45.5 Referencia.
Recueil des méthodes internationales d’Analyse des vins. A43k, páginas 1-6.
46. MERCURIO
46.1 Principio.
Oxidación de la materia orgánica con ácido nítrico y crómico, reducción de las sales mercúricas por acción de Sn++, volatilización del Hg metálico, arrastre del mismo por corriente de aire y determinación de su absorbancia a 253,7 nanómetros.
Este método es aplicable a concentraciones de mercurio superiores a 0,05 mg/l.
46.2 Material y aparatos.
46.2.1 Espectrofotómetro de absorción.
46.2.2 Lámpara de mercurio.
46.2.3 Aparato para la reducción del ion mercúrico a mercurio metal y posterior arrastre de éste con corriente de aire (figura 46.1).
46.2.4 Matraces de reacción de forma cónica de 100 ml de capacidad.
46.2.5 Bomba peristáltica accionada con motor provisto de vaciador de velocidad.
46.2.6 Llave de purga en T de teflón.
46.2.7 Tubo flexible de tigón de 1/8 pulgada de diámetro interior y un metro, aproximadamente, de longitud.
46.3 Reactivos.
46.3.1 Ácido sulfúrico, exento de mercurio.
46.3.2 Oxido de mercurio.
46.3.3 Cloruro estannoso, exento de mercurio.
46.3.4 Oxido de cromo, exento de mercurio.
46.3.5 Solución de ácido crómico al 5 por 100.‒Llevar a un vaso de 500 ml 25 g de óxido de cromo y disolverlos en 25 ml de agua destilada. Añadir lentamente y agitando ácido sulfúrico concentrado hasta enrasar a 500 ml cuando la solución esté fría.
46.3.6 Solución reductora.‒Solución al 40 por 100 de cloruro estannoso en agua destilada, acidulada con sulfúrico.
46.3.7 Solución patrón.‒Disolver 1,080 g de óxido de mercurio en 100 ml de ácido clorhídrico al 50 por 100; enrasar con agua a 1.000 ml. Mediante dilución 1/1.000 se obtiene la solución de 1 mg/l.
46.4 Procedimiento.
46.4.1 Preparación de la muestra.
Tomar 1 ml de muestra y colocarla dentro de un matraz cónico. Añadir 2 ml de ácido nítrico. Cerrar con película de parafina y dejarlo en digestión durante sesenta minutos a temperatura ambiente. Añadir 5 ml de ácido crómico al 5 por 100, refrigerando durante la adición en baño de hielo. Tapar el matraz y dejarlo durante sesenta minutos, agitando cada diez minutos. Transcurrido este tiempo, añadir 15 ml de agua destilada, enfriando durante la adición con baño de hielo. Una vez fríos los matraces, añadir 2 g, aproximadamente, de sulfato de hidroxilamina, agitar y acoplar los matraces al aparato de medida. Añadir 10 ml de solución reductora. Continuar como en 46.4.3.
46.4.2 Construcción de la curva patrón.
A partir de 46.3.7, tomar 0,5, 10, 15, 20 y 25 ml. Tratarlas a continuación como se indica en 46.4.1. Estas soluciones contienen 0, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 y 0,5 partes por millón de Hg. Anotar las absorbancias obtenidas frente a las concentraciones correspondientes.
46.4.3 Determinación.
Efectuar la lectura de la absorbancia de la muestra. Una vez preparada según 46.4.1.
46.5 Referencias.
1. A. Bouchard: «Determination of mercury after soon temperature digestión by flamaless atomic absorption.» Atom. Absorpt. Newsletter, vol. 12, número 5 (115-117), 1973.
2. A. García de Jalón y J. Frías: «Un método para la determinación de mercurio en vinos mediante espectrofotometría de absorción atómica sin llama.» Ministerio de Agricultura. Abril 1972.
47. PLOMO
47.1 Principio.
Determinación del plomo por A. A. después de una concentración previa con objeto de conseguir resultados suficientemente precisos.
47.2 Material y aparatos.
47.2.1 Espectrofotómetro de absorción atómica.
47.2.2 Lámpara de plomo.
47.2.3 Cápsula de platino de 100 ml de capacidad o similar.
47.2.4 Baño de arena.
47.2.5 Mufla con circulación de aire.
47.2.6 Matraces de 10, 100 y 1.000 ml de capacidad.
47.3 Reactivos.
47.3.1 Ácido sulfúrico del 96 por 100 (d = 1,835).
47.3.2 Ácido nítrico del 70 por 100 (d = 1,413).
47.3.3 Ácido nítrico al 1 por 100 en agua destilada (v/v).
47.3.4 Solución patrón de 1.000 ppm de plomo. Disolver 1,598 gramos de (NO3)2Pb enrasando a 1.000 ml con ácido nítrico al 1 por 100.
47.4 Procedimiento.
47.4.1 Preparación de la muestra.‒Poner 100 ml de la muestra en una cápsula de platino y llevarla a evaporación hasta consistencia siruposa en baño de arena. Añadir a continuación 2 ml de ácido sulfúrico y carbonizar el residuo en el baño de arena. Seguidamente introducir la cápsula en la mufla y mantenerla durante dos horas a 450 °C; transcurrido dicho tiempo, sacarla y dejarla enfriar. Añadir 1 ml de ácido nítrico concentrado, evaporar en el baño de arena e introducir en la mufla, repitiendo esta operación hasta obtener cenizas blancas. Disolver a continuación las cenizas con 1 ml de ácido nítrico concentrado y 2 ml de agua destilada, una vez disueltas filtrar y recoger el filtrado en un matraz de 10 ml, lavando la cápsula y el filtro con agua destilada hasta el enrase.
47.4.2 Construcción de la curva patrón.‒A partir de la solución patrón 46.3.4, tomar alícuotas de 0,2; 0,4; 0,6; 0,8, y 1 ml, y llevar a 100 ml con ácido nítrico al 1 por 100 (v/v).
El contenido en plomo de estas soluciones es, respectivamente, 2, 4, 6, 8 y 10 p.p.m. Anotar las absorbancias obtenidas frente a las concentraciones correspondientes.
47.4.3 Determinación.‒Efectuar la lectura directa de la muestra preparada según 47.4.1 a 283,3 nm.
47.5 Cálculos.
Calcular el contenido en plomo, expresado en p.p.m. mediante comparación con la correspondiente curva patrón y teniendo en cuenta e1 factor de dilución.
39(b). FLÚOR
39(b).1 Principio.
Determinación directa del flúor total por potenciometría utilizando un electrodo iónico específico.
Para eliminar las posibles causas de error se le adiciona al vino una solución tampón.
39(b).2 Material y aparatos.
39(b).2.1 pH-metro con escala que permita apreciar 0,1 mV.
39(b).2.2 Electrodo selectivo de flúor.
39(b).2.3 Electrodo de referencia de calomelanos.
39(b).2.4 Microbureta graduada en 1/100 de ml.
39(b).2.5 Recipientes de plástico de 50-100 ml de capacidad para mezclas y matraces en material de plástico para conservar las soluciones patrón.
39(b).2.6 Pipetas de precisión graduadas en microlitros.
39(b).2.7 Agitador magnético.
39(b).3 Reactivos.
39(b).3.1 Solución patrón de fluoruros 10‒2 M conteniendo 190 mg de F‒por litro. Pesar 0,4198 g de FNa (desecado durante cuatro horas a 106 °C antes de su utilización), disolver y enrasar a un volumen de 1.000 mL
39(b).3.2 Solución tampón de PO4H3 0,75 M.
39(b).4 Procedimiento.
39(b).4.1 Verificación del electrodo y determinación de su pendiente.
A partir de la solución 3.1 preparar, mediante diluciones, soluciones de concentraciones conocidas de 10‒3 M, 10‒4 M y 10‒5 M, que contienen, respectivamente, 19, 1,9 y 0,19 mg de F‒, por litro.
Tomar dos vasos de precipitados; en uno de ellos colocar 25 ml de la disolución 10‒3 M de F‒, adicionar 5 ml de solución tampón de PO4H3 y determinar su potencial agitando de forma moderada mientras dure la medida. En el otro vaso, poner 25 ml de disolución 10‒4 M de F‒, 5 ml de solución tampón de PO4H3 y determinar su potencial, agitando como anteriormente. La diferencia entre los dos potenciales es la pendiente del electrodo (S) y cuyo valor debe ser, aproximadamente, 59 mV.
39(b).4.2 Determinación.
Tomar 25 ml de vino, adicionar 5 ml de la solución tampón y determinar su potencial (E1). A continuación, y en el mismo vaso, adicionar un ml de disolución 10‒3 M de F‒ y determinar su potencial (E2).
Si el salto de potencial es pequeño, indica que la concentración de F‒ es muy alta y hay que diluir la muestra hasta que el salto alcanzado esté comprendido alrededor de 20-40 mV.
Los volúmenes de muestra y solución tampón pueden ser modificados en función de la forma y disposición de los electrodos utilizados.
39(b).5 Cálculos.
La cantidad de flúor, expresada en mg/l, nos viene determinada por la fórmula:
Siendo:
CF‒ = concentración, en mg/l, de F‒ en el medio.
V = volumen, en ml, de solución patrón de fluoruro añadida.
C = concentración, en mg/l, de la solución patrón adicionada.
S = pendiente del electrodo.
ΔE = diferencia de los potenciales E1 y E2 obtenidos en 39(b).4.2.
Este valor se deberá multiplicar por el factor de dilución correspondiente, en caso de haber sido necesario efectuarla.
39(b).6 Observaciones.
39(b).6.1 Todas las soluciones deben conservar una temperatura próxima a 25 °C ± 1 °C durante la medida.
39(b).7 Referencias.
1. H. E. Haller y C. H. Junge, 1974, O. I. V. 317/FV/518 y 133/FV/439.
2. Deschreider, A., y Mme. R. Meaux, 1974. Determination des flúor dans les vins et eaux minerales naturelles au moyen d’une electrode ionique specifique.
48. RELACIÓN P/α
48.1 Principio.
Estimación de los contenidos relativos de glucosa y fructosa, en mostos, vinos dulces y mistelas, mediante el establecimiento de la relación entre azúcares reductores y desviación polarimétrica a 20 °C.
48.2 Material y aparatos.
48.2.1 Como en 7(a).2; 7(b).2 o 7(c).2.
48.2.2 Polarímetro con luz monocromática amarilla (lámpara vapor de sodio) y tubo de 20 cm.
48.3 Procedimiento.
48.3.1 Determinar el contenido en azúcares reductores según el método 7(a), 7(b) o 7(c).
48.3.2 Medida de la desviación polarimétrica.
Una vez verificado el correcto reglaje del polarímetro, comprobando la correspondencia del valor «cero» con la existencia de un campo luminoso uniforme, ajustándolo si es necesario, introducir en el tubo del polarímetro el líquido de defecación sin diluir, incoloro y limpio, utilizando para la determinación de azúcares reductores, evitando la formación de burbujas de aire. Anotar la temperatura del líquido que debe ser lo más próxima posible a 20°C.
Efectuar la lectura de la desviación polarimétrica varias veces sucesivas, tomando la media de los resultados obtenidos.
48.4 Cálculos.
Determinar el poder rotatorio y la relación P/oc aplicando las fórmulas siguientes:
OC20 = oct + oct (t ‒ 20) x K
P/OC20 (expresado con su correspondiente signo)
Siendo:
P = g/l de azúcares reductores.
oct = poder rotatorio en divisiones sacarimétricas a t °C (un grado polarimétrico = 4,615 divisiones sacarimétricas).
OC20 = poder rotatorio en divisiones sacarimétricas a 20 °C.
t = temperatura del líquido en el momento de la lectura.
K = coeficiente variable con la naturaleza de los azúcares, dado por la tabla I en función del valor P/oct.
48.5 Referencias.
1. J. Blouin. Manual practique d’analyse des Moúts et Vins. 1977.
2. J. Ribereau Gayón, E. Peynaud. Sciences et Techniques du Vin. Tome I. 1972.
TABLA I
| P/oct | K |
|---|---|
| ‒ 1,19 | 0,006 |
| ‒ 1,41 | 0,007 |
| ‒ 1,73 | 0,008 |
| ‒ 2,24 | 0,009 |
| ‒ 2,64 | 0,012 |
| ‒ 3,20 | 0,012 |
| ‒ 4,06 | 0,013 |
| ‒ 5,56 | 0,014 |
| ‒ 8,8 | 0,022 |
| ‒ 21 | 0,042 |
VINAGRES
9. METANOL, METODO DEL ÁCIDO CEOMOTRÓPICO
9.1 Principio.
Como en 37.1 de los métodos oficiales de análisis de vinos.
9.2 Material y aparatos.
Como en 37.2 de los métodos oficiales de análisis de vinos.
9.3 Reactivos.
9.3.1 Como 37.3.1 de los métodos oficiales de análisis de vinos.
9.3.2 Ídem.
9.3.3 Ídem.
9.3.4 Etanol de 96° (v/v).
9.3.5 Matraz aforado de 25 ml.
9.4 Procedimiento.
Tomar 25 ml de vinagre, destilar en destilador simple y recoger 15 ml de destilado en matraz aforado de 25 ml sumergido en baño de hielo. Añadir el etanol suficiente para que una vez enrasado a 25 ml con agua destilada la concentración del etanol sea del 5-6 por 100 (9.6.1). Continuar como en 37.4 de los métodos oficiales de análisis de vinos.
9.5 Cálculo.
Como en 37.5 de los métodos oficiales de análisis de vinos.
9.6 Observaciones.
9.6.1 En vinagres normales suele ser suficiente añadir 1,5 por 100 de alcohol de 96 por 100.
9.7 Referencias.
1. Association of Official Agricultural Chemists Official Methodos of Analysis, 1965, página 138.
10(a). ÁCIDO TARTÁRICO
(Método cualitativo)
10(a).1 Principio.
Precipitación del ácido tartárico en forma de bitartrato potásico.
10(a).2 Material y aparatos.
10(a).2.1 Centrífuga.
10(a).3 Reactivos.
10(a).3.1 Ácido acético concentrado puro.
10(a).3.2 Solución de precipitación.
Disolver 300 g de cloruro de potasio puro, 5,75 g de tartrato de sodio y potasio (sal de Seignette) y 1,25 g de oxalato de potasio y enrasar a 1.000 ml con agua destilada.
A baja temperatura la solución deposita pequeños cristales, por lo que se debe de calentar ligeramente antes de emplearse.
10(a).3.3 Etanol de 96°.
10(a).4 Procedimiento.
Poner en un tubo de centrífuga 10 ml de vinagre, 0,4 ml de ácido acético 7,5 ml de la solución de precipitación y 2 ml de etanol. Agitar con una varilla de vidrio hasta que aparezca un enturbiamiento cristalino aproximadamente a los diez segundos. Mantener el tubo durante una hora a 8 ºC aproximadamente. Al cabo de este tiempo agitar enérgicamente el contenido del tubo con una varilla de vidrio, con la precaución de mezclar bien con la solución que sobrenada. Dejar en reposo aproximadamente a 8 ºC durante una hora. Transcurrido este tiempo centrifugar.
10(a).5 Interpretación de resultados.
La aparición de precipitado indica la presencia de ácido tartárico en la muestra.
10(a).6 Referencias.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A-12-h.
10(b). ÁCIDO TARTÁRICO
(Método cuantitativo)
10(b).1 Principio.
Aislamiento del ácido tartárico mediante columna de resinas cambiadoras de aniones y posterior valoración clorimétrica.
10(b).2 Material y aparatos.
10(b).2.1 Resinas aniónicas de basicidad fuerte (III Merck o equivalente). Las resinas deben de encontrarse en forma de acetato. Para ello deben estar al menos veinticuatro horas en contacto con una solución de ácido acético al 30 por 100.
10(b).2.2 Columnas de vidrio de 10-11 mm de diámetro y 30 cm de longitud con llave en la parte inferior.
10(b).3 Reactivos.
10(b).3.1. Ácido acético al 30 por 100 (v/v).‒Introducir 300 mililitros de ácido acético glacial en un matraz aforado y completar a 1.000 ml con H2O destilada.
10(b).3.2 Ácido acético al 0,5 por 100 (v/v).‒Introducir 5 mililitros de ácido acético glacail en un matraz aforado y completar hasta 1.000 ml con H2O destilada.
10(b).3.3 Solución de sulfato de sodio al 7,1 por 100 (0,5 N).‒Disolver 71 g de sulfato de sodio anhidro (Na2SO4) y completar con agua destilada hasta 1.000 ml.
10(b).3.4 Reactivo vanádico.‒Disolver 10 g de metavanadato de amonio en 150 ml de una solución de NaOH N. Pasar esta solución a un matraz aforado de 500 ml, añadir seguidamente 200 ml de una solución de acetato de sodio al 27 por 100 y llevar luego a 500 ml con H2O destilada.
10(b).3.5 Solución de SO4H2 2 N.
10(b).3.6 Solución de SO4H2 0,1 N.
10(b).3.7 Solución de ácido peryódico 0,1 N (0,05 M).‒Introducir 10,696 g de peryodato de sodio en un matraz aforado de 1.000 ml, añadir 50 ml de SO4H2 N y completar hasta 1.000 mililitros con H2O destilada.
10(b).3.8 Solución de glicerol al 10 por 100.‒Pesar 10 g de glicerol muy puro bidestilado y llevarlo a 100 ml con H2O destilada.
10(b).3.9 Solución de ácido tartárico de 1 g por litro.‒En un matraz aforado de 500 ml disolver 500 mg de ácido tartárico (puro) en 6,6 ml de sosa N y enrasar con solución de sulfato de sodio al 7,1 por 100 a 500 ml.
10(b).4 Procedimiento.
10(b).4.1 Preparación de las columnas de resinas aniónicas. Colocar en el fondo de la columna [10(b).2.2] lana de vidrio formando tapón de 2-3 mm de altura, aproximadamente, y añadir agua hasta una altura de unos 5 mm sobre el tapón de lana de vidrio. Añadir después al resina cambiadora de aniones, conservada en ácido acético al 30 por 100, agitar esta suspensión y agregar rápidamente un volumen de unos 10 ml, evitando la formación de burbujas de aire, depositando en la superficie un tapón de lana de vidrio, que se conduce con una varilla de vidrio, con el fin de no remover las resinas en los sucesivos lavados anteriores en su superficie. Las resinas solamente pueden servir para una sola vez.
10(b).4.2 Aislamiento del ácido tartárico.‒Abrir la llave inferior de la columna y dar salida al ácido acético diluido hasta unos 2-3 ml por encima del tapón de lana superior. Añadir seguidamente unos.10 ml de ácido acético al 0,5 por 100 y vaciar hasta igual altura; efectuar estos lavados cuatro veces.
Después del último lavado y con la llave cerrada, adicionar 10 ml de vinagre a analizar y señalar la altura alcanzada con un lápiz graso, abrir a continuación la llave y dejar salir vinagre goteando a razón de 1-1,5 gotas por segundo (25-30 ml por minuto) hasta un poco por encima del tapón superior de lana vidrio. Llenar de nuevo la columna con ácido acético al 0,5 por 100 hasta la señal del lápiz graso y dejar salir a la misma velocidad que la vez anterior y lavar después en la misma forma siete veces con 10 ml de agua destilada.
Al terminar el último lavado, cerrar la llave cuando el nivel del líquido se encuentre un poco más arriba del tapón de lana de vidrio superior.
Colocar un matraz receptor aforado de 100 ml. Eluir los ácidos fijados en el cambiador de aniones, mediante adiciones de solución de sulfato de sodio 110(b).3.31 hasta la señal trazada en el tubo.
Para hacer esta operación resulta práctico colocar un frasco con solución de sulfato unido por el cuello a la columna mediante un manguito de caucho y con unas pinzas para regular la, caída del líquido en la bureta o tubo. Puesto así en comunicación los dos aparatos (frasco y bureta o tubo), abrir las pinzas del caucho de unión y la llave inferior, dejando caer el líquido a la bureta hasta unos 10 cm de altura y sin que queden huecos vacíos. Regular la salida del líquido en la proporción que queden huecos vacíos. Regular la salida del líquido en la proporción de 2-3 gotas por segundo, para llenar el matraz receptor hasta el enrase.
10(b).4.3 Determinación del ácido tartárico.‒En dos matraces cónicos de 100 ml (A) y (B) introducir 20 ml del eluido. El matraz (A) sirve para la medida y el matraz (B), en el cual el ácido tartárico es destruido por el ácido pervódico, constituye el testigo.
Añadir al matraz (A) 2 ml de SO4H2 2 N, 5 ml de SO4H2 0,1 N y 1 ml de glicerol al 10 por 100.
En el matraz (B), añadir 2 ml de SO4H2 2 N, 5 ml de ácido peryódico 0,1 N, esperar quince minutos y añadir 1 ml de solución de glicerol al 10 por 100 para destruir el exceso de ácido peryódico. Esperar dos minutos.
Verter a continuación, agitando, primero en el matraz (B) e inmediatamente después en el matraz (A). 5 ml del reactivo vanádico. Disparar inmediatamente un cronómetro e introducir el contenido de dichos matraces en las cubetas de caras paralelas de lo mm de espesor del espectrofotómetro. Al cabo de un minuto y treinta segundos medir la densidad óptica a 490 nm del líquido procedente del matraz (A) (medida) después de haber reglado el aparato para obtener la transmisión al 100 por 100 con la cubeta conteniendo el líquido testigo (B).
10(b).5 Cálculo.
10(b).5.1 Preparación de la curva patrón.‒Tomar 10, 20, 30, 40 y 50 ml de la solución 10(b).3.9 e introducir cada alícuota en un matraz aforado de 100 ml. Enrasar con solución de sulfato de sodio al 7,1 por 100. Las diferentes diluciones corresponden a eluidos del vinagre conteniendo 1, 2, 3, 4 y 5 g de ácido tartárico por litro.
En dos matraces (A) y (B) de 100 ml poner 20 ml de cada una de estas soluciones y tratarlas idénticamente igual a los eluidos del vinagre anteriormente descrito.
La representación gráfica de las densidades ópticas de estas soluciones está en función de la cantidad de ácido tartárico. Para ello es recomendable y más preciso partir de concentraciones 0,1; 0,2; 0,3; 0,4: 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 y 1 g/l de ácido tartárico.
10(b).5.2 Comprobar los valores obtenidos en el ensayo con los correspondientes de la curva patrón.
10(b).6 Referencias.
1. Recueil des Méthodes d’Analyse des Vins Al2h.
11. COBRE
11.1 Principio.
Determinación directa por espectrofotometría de absorción atómica.
11.2 Material y aparatos.
Espectrofotómetro de absorción atómica, con lámpara específica de cobre.
11.3 Reactivos.
11.3.1 Solución patrón de 1.000 mg/l de Cu.‒Disolver 1.000 g de cobre puro en el mínimo volumen necesario de NO3H (1 + 1) y diluir a 1 litro con NO3H al 1 por 100 (v/v).
11.3.2 Soluciones que contengan de 1 a 10 mg/l de Cu.‒Diluir partes alícuotas de la solución patrón con ácido acético al 5 por 100
11.4 Procedimiento.
11.4.1 Calibrado del aparato.‒Ajustar el aparato a una longitud de onda de 324,7 nm en condiciones tales que se obtenga una respuesta lineal al introducirse las series de patrones preparados.
11.4.2 Determinación.‒Efectuar la lectura directa de la absorbancia.
11.5 Interpretación de resultados.
Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos, hallar mediante la curva patrón las concentraciones de cobre de la muestra.
11.6 Referencias.
1. G. Charlot et D. Bezier: «Analyse quantitative mlnerale». El Masson. París (1955). 749-752.
2. H. E. Parker: «Atomic Absorption Newlette» (1963), 13.
3. Standart conditionc for Zn and Cu. Analytical Methods for atomic absorption spectrophotometry «Perkin-Elmer».
4. F. Rouselet: «Spectrophotometrie par absorption atomique Boudin». Ed. París (1968), págs. 59-144.
12. CLORUROS
12.1 Principio.
Determinación directa de cloruros por potenciometría utilizando el electrodo Ag/AgCl.
12.2 Material y aparatos.
12.2.1 pH-metro con escala que permita apreciar 2 mV.
12.2.2 Agitador magnético.
12.2.3 Electrodo Ag/AgCl con una solución saturada de nitrato de potasio como electrolitro.
12.2.4 Microbureta graduada en 1/100 de mililitro.
12.3 Reactivos.
12.3.1 Solución patrón de cloruros.‒Disolver 2,1027 g de cloruro de potasio puro para análisis (máximo 0,005 por 100 de bromo), previamente desecado, en agua destilada hasta 1 litro, 1 ml de esta solución contiene 1 mg de ion cloro.
12.3.2 Solución de nitrato de plata.‒Disolver 4,7912 g de nitrato de plata en una solución alcohólica al 10 por 100 (v/v) hasta 1 litro; 1 ml de esta solución corresponde a 1 mg de ion cloro.
12.3.3 Ácido nítrico concentrado (d = 1,40).
12.4 Procedimiento
12.4.1 Determinación del potencial del punto de equivalencia.‒Introducir 5,0 ml de la solución patrón de cloruros en un vaso de 150 ml. Diluir aproximadamente a 100 ml con agua destilada y acidificar con 1.0 ml de ácido nítrico (12.3.3). Introducir los electrodos. Añadir la solución de nitrato de plata agitando moderadamente
Los cuatro primeros mililitros se adicionan en fracciones de 1 ml y se leen las correspondientes lecturas en milivoltios; los dos siguientes mililitros, en fracciones de 0,2 ml y se continúa adicionando en fracciones de 1 ml hasta que se hayan alcanzado un total de 10 ml. Después de cada adición se debe esperar unos treinta segundos antes de hacer la correspondiente lectura en milivoltios. Los valores así obtenidos se llevan sobre un papel milimetrado en función de los correspondientes mililitros de solución de nitrato de plata, y a partir del punto singular de la curva obtenida, determinar el potencial del punto de equivalencia.
Para comprobar el potencial del punto de equivalencia, llevar a un vaso de 150 ml, 5,0 ml de la solución patrón de cloruros, 95 ml de H2O destilada y 1 ml de ácido nítrico concentrado. Introducir el electrodo y valorar agitando, justamente hasta el potencial del punto de equivalencia.
Repetir esta operación hasta obtener una buena concordancia de resultados
Este control debe de efectuarse antes de determinar la concentración de cloruros en cada serie de muestras a analizar.
12.4.2 Determinación.‒Llevar a un vaso de 150 ml 50,0 ml de vinagre. Añadir 50 ml de H2O destilada y 1 ml de ácido nítrico concentrado. Valorar a continuación, siguiendo el procedimiento descrito anteriormente, hasta alcanzar el potencial del punto de equivalencia.
12.5 Cálculos.
La cantidad de cloruros se determina mediante las expresiones:
0,02 n en gramos de ion cloro.
0,5633 n en miliequivalentes por litro de ion cloro.
0,0329 n en gramos de cloruro sódico por litro.
Siendo:
n = volumen, en ml de solución de nitrato de plata necesario para alcanzar el potencial del punto de equivalencia.
12.6 Referencias.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse de Vins. OIV A-15j.
13. GRADO ALCOHÓLICO
13.1 Principio.
Separación del alcohol por destilación, oxidación del mismo por dicromato potásico y determinación del contenido por valoración del exceso de dicromato.
13.2 Material y aparatos.
Como en los apartados 5(a).2.1; 5(a).2.1.1; 5(a).2.1.2; 5(a).2.1.3 y 5(a).2.1.4 de los métodos Oficiales de Análisis de Vinos.
13.3 Reactivos.
13.3.1 Solución de dicromato potásico.‒Disolver 33,608 g de dicromato potásico puro en una cantidad suficiente de agua destilada y completar hasta 1 litro a 20 °C. Esta solución corresponde al grado alcohólico internacional O. I. V.
1 ml de esta solución óxida 7,8934 mk de alcohol.
13.3.2 Solución de sulfato de hierro y de amonio. Disolver 135 g de sulfato ferroso amoniacal y 20 ml de ácido sulfúrico puro en una cantidad de agua suficiente y completar hasta 1 litro, un volumen de esta solución corresponde a medio volumen de solución de dicromato potásico cuando está recientemente preparada. Esta solución se oxida lentamente, por lo que debe ser valorado frecuentemente en la misma que se realiza la determinación del alcohol, sustituyendo la disolución alcohólica por agua destilada.
13.3.3 Solución de permanganato potásico.‒Disolver 1,088 gramos de permanganato potásico en una cantidad suficiente de agua y completar hasta 1 litro.
13.3.4 Solución de ácido sulfúrico diluido.‒A 500 ml de agua destilada añadir, poco a poco y agitando, 500 ml de ácido sulfúrico puro. Después de enfriado, completar hasta 1 litro con agua destilada.
13.3.5 Reactivo de ortofenantrolina ferrosa.‒Disolver 0,695 gramos de SO4 Fe 7H2O en 100 ml de agua, añadir 1,485 gramos de monohidrato de ortofenantrolina. Calentar para favorecer la disolución.
13.3.6 Lechada de cal 4N.
13.4 Procedimiento.
13.4.1 Destilación.‒Medir 200 ml de vinagre en matraz aforado y anotar la temperatura. Introducir el vinagre en el matraz de destilación que contenga unos fragmentos de material poroso. Lavar el matraz cuatro veces con 5 ml de agua. Alcalinizar con un ligero exceso de lechada de cal 4N. Recoger el destilado en matraz aforado de 100 ml. Enrasar con agua a la misma temperatura que se midió el vinagre inicialmente.
13.4.2 En un matraz Erlenmeyer, con tapón esmerilado, de 250 ml, poner 20 ml de solución valorada de dicromato potásico, 20 ml de ácido sulfúrico diluido y agitar. Añadir 10 ml de destilado exactamente medidos. Tapar el Erlenmeyer, agitar y esperar por lo menos treinta minutos, agitando de vez en cuando.
13.4.3 Valoración.‒Valorar el exceso de dicromato con la solución de sulfato ferroso amónico. Cuando la coloración verde de la solución vire a verde azulado, añadir cuatro gotas de reactivo de ortofenantrolina. Detener la adición de solución ferrosa cuando el líquido vire a marrón.
A menudo se puede llegar a pasar el viraje, siendo entonces necesario volver al punto preciso, adicionando solución de permanganato potásico. Un décimo del volumen empleado de esta solución se resta del volumen empleado de sulfato ferroso.
Hacer una prueba en blanco sustituyendo los 10 ml de destilado por agua.
13.5 Cálculos.
Siendo:
n = volumen, en ml, gastados en la valoración.
n’ = volumen, en ml, gastados en la prueba en blanco.
13.6 Observaciones.
Si el grado alcohólico del vinagre es superior a 0,8°, repetir la oxidación utilizando 10 ml de destilado diluido a 1/2.
13.7 Referencias.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A-2-16.
14. ARSÉNICO
14.1 Principio.
Reducción del arsénico a arsenamina gaseosa que reacciona con dietilditiocarbamato de plata (disuelto en piridina), dando un complejo de color rojo.
14.2 Material y aparatos.
14.2.1 Aparato Quickfit (figura I).
14.2.2 Espectrofotómetro o colorímetro que permita lecturas a 538 nm.
14.3 Reactivos.
14.3.1 Solución de dietilditiocarbamato de plata.‒Disolver 1.000 g de este reactivo en 200 ml de piridina para cromatografía. Esta solución puede conservarse algunas semanas.
14.3.2 Acetato de plomo en algodón.‒Impregnar el algodón hidrófilo en solución acuosa de acetato de plomo al 10 por 100, escurrir el líquido en exceso y desecar al vacío.
14.3.3 Solución acuosa de ioduro potásico al 15 por 100.
14.3.4 Solución acuosa de sulfato de cobre al 2 por 100.
14.3.5 Solución de cloruro estannoso.‒Disolver 0,33 g de cloruro estannoso en 100 cc de ClH al 32 por 100 (d = 1,16).
14.3.6 Zn puro granulado, exento de arsénico.
14.3.7 Ácido nítrico (d = 1,40).
14.3.8 Ácido sulfúrico (d = 1,84).
14.3.9 Solución de 100 mg/l de arsénico.
14.4 Procedimiento.
14.4.1 Preparación de la muestra.‒En un matraz Kjeldahl de 500 ml introducir 100 ml de vinagre con 100 ml de NO3H (d = 1,40), para evitar las pérdidas de As. Llevar a ebullición hasta reducir el volumen a 10 ml, añadir 5 ml de ácido sulfúrico (d = 1,84) y continuar la ebullición adicionando NO3H gota a gota hasta la total decoloración. Después de la expulsión de los vapores nitrosos dejar enfriar, diluir con 10 ml de agua destilada y calentar hasta casi sequedad. Una vez frío el matraz, trasvasar el residuo al matraz de valoración utilizando 40 ml de agua destilada.
14.4.2 Valoración.‒Poner en el tubo en U, 3 ml de la solución de dietilditiocarbamato de plata. Colocar en la parte superior del tubo intermedio del aparato el algodón impregnado en acetato de plomo con objeto de retener el sulfídrico y la fosfamina que puedan desprenderse al mismo tiempo que la arsenamina.
Introducir la muestra preparada en el Erlenmeyer de 100 ml del aparato descrito y añadir sucesivamente 10 ml de la solución de cloruro estannoso, 5 ml de la solución de ioduro potásico y 1 ml de la solución de sulfato de cobre. Después de quince minutos añadir 5 gramos de Zn granulado y cerrar rápidamente el aparato. Colocarlo en la oscuridad y dejar pasar vapores por lo menos durante una hora.
14.4.3 Preparación de la curva patrón.‒A partir de una solución 14.3.9., preparar soluciones que contengan 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 μg de arsénico por litro.
14.5 Cálculos.
Calcular el contenido en arsénico utilizando la correspondiente curva patrón.
14.6 Observaciones.
14.6.1 Interfiere en la determinación el antimonio cuyo complejo absorbe a 510 nm.
14.6.2 La Ley de Lambert-Beer se cumple entre las concentraciones de 0 y 15 microgramos de As.
14.6.3 Este método tiene un límite de detección de 0,2 microgramos.
14.7 Referencias.
1. Vasak. V y Sedivec V (1952) Chem. Listy 46, 341, citado por M. D. Garrido, M. L Gil y C. Llaguno. An. Bromatología XXVI-2 (1974), 167-176.
2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analys des Vins. O. I. V. A-34 f.
15. CINC
15.1 Principio.
Determinación directa por espectrofotometría de absorción atómica.
15.2 Material y aparatos.
15.2.1 Espectrofotómetro de absorción atómica.
15.2.2 Lámpara de cinc.
15.3 Reactivos.
15.3.1 Solución patrón de 1.000 ppm de Zn.‒Disolver 1.000 gramos de Zn puro en el mínimo volumen necesario de ácido nítrico (1 + 1) y diluir a 1 litro con ácido nítrico al 1 por 100 (v/v).
15.4 Procedimiento.
15.4.1 Preparación de la muestra.‒No se necesita preparación especial. En caso de elevada concentración, realizar una o varias diluciones hasta quedar dentro del rango de medida.
15.4.2 Determinación.‒Diluir partes alícuotas de la solución (15.3.1) con ácido acético al 5 por 100 para obtener soluciones de 0, 0,5, 1, 1,5 y 2 ppm. Aspirar las soluciones patrón y a continuación la muestra, anotando las absorbancias obtenidas a 213,8 nm.
15.5 Interpretación de resultados.
Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos, hallar las concentraciones de cinc de la muestra.
15.6 Referencias.
1. H. E. Parker, Atomic Absorption Newsletter (1963), 13.
2. Standar conditions for Zn and Cu. Analytical Methods for atomic absorption spectrophotometry «Perkin-Elmer».
6. ACETILMETILCARBINOL (ACETOÍNA)
6.1 Principio.
Determinación cuantitativa de la acetoína por cromatografía de gases.
6.2 Material y aparatos.
6.2.1 Equipo de cromatografía de gases compuesto por:
6.2.1.1 Detector de ionización de llama.
6.2.1.2 Horno con temperatura regulable.
6.2.1.3 Registrador.
6.2.1.4 Gases: Aire-nitrógeno.
6.2.1.5 Columna: FFAP 2,5 por 100 sobre Chromosorb G (HP), añadiéndose un 0,5 de un reductor de colas (p. e., Carbowax 1.500) y de dimensiones 2 metros de longitud y 1/8 de pulgada de diámetro externo de la columna.
6.2.2 Microjeringa de 1 a 10 μl.
6.3 Reactivos.
6.3.1 Acetoína.
6.3.2 Pentanol-1.
6.3.3 Alcohol etílico absoluto.
6.3.4 Hidróxido cálcico.
6.4 Procedimiento.
6.4.1 Disoluciones patrón.
6.4.1.1 De acetoína: A partir de acetoína purificada de su posible contenido en diacetilo mediante destilación, obtener soluciones de acetoína que cubran un rango de concentraciones de 10 a 500 mg/l en agua destilada.
6.4.1.2 De patrón interno: Añadir 2 ml de pentanol-1 en 100 ml de solución hidroalcohólica al 50 por 100.
6.4.2 Determinación.
6.4.2.1 Condiciones cromatográficas.
Gas portador: Nitrógeno (flujo de 12,5 mg/min).
Temperatura horno: 70 °C.
Temperatura inyector: 180 °C.
Inyección: 4 o 2 μl.
Patrón interno: Pentanol-1.
6.4.2.2 Método operatorio.
A cada una de las soluciones patrón de acetoína preparadas en 6.4.1.1 añadir solución de pentanol-1, de tal forma que las soluciones que contengan de 10 a 50 mg/l de acetoína se le añadan 15 μl y a las que contengan de 50 a 500 mg/l se le añadan 35 μl, e inyectarlas a continuación, obteniendo la curva de calibrado (se deben efectuar dos curvas de calibrado, una que cubra el rango de 0-50 mg/l de acetoína y otra de 50 a 300 mg/l).
La inyección de la muestra puede efectuarse directamente del vinagre una vez añadido el patrón interno, pero teniendo en cuenta que el tiempo de retención es elevado y la concentración del acético es muy grande, obliga a esperar un largo período de tiempo entre dos inyecciones sucesivas. Para evitar esta dificultad, deben neutralizarse a pH = 7 las muestras, preferiblemente con Ca(OH)2 sólido, para evitar variaciones de volumen. Téngase en cuenta que la concentración de acetoína en el medio neutro puede variar con el tiempo, por lo que la neutralización debe hacerse inmediatamente antes de inyectar en el cromatógrafo.
6.5 Cálculos.
Los cromatogramas obtenidos de las distintas soluciones patrón permiten representar gráficamente la relación existente entre el cociente:
La relación de áreas obtenida para la muestra se compara con la curva de calibrado (concentración de acetoína/relación de áreas), obteniéndose la cantidad de acetoína de la muestra.
6.6 Referencias.
1. E. F. Gorostiza, M. L. Gil de la Peña y M. C. Gómez Cordobés. Instituto de Fermentaciones Industriales.
16. PROLINA
16.1 Principio.
Determinación cuantitativa de la prolina por reacción con ninhidrina en medio ácido.
16.2 Material y aparatos.
16.2.1 Tubos de ensayo con tapón de rosca.
16.2.2 Espectrofotómetro o colorímetro que permita efectuar lecturas a 517 nm.
16.3 Reactivos.
16.3.1 Ninhidrina al 3 por 100 en éter monometílico del etilenglicol.
16.3.2 Ácido fórmico.
16.3.3 Isopropanol agua 1:1 (v/v).
16.4 Procedimiento.
Diluir la muestra hasta que contenga de 0,05 a 0,50 milimoles/ml de prolina. Tomar 1/2 ml de muestra diluida a introducirla en un tubo de ensayo con tapón de rosca, añadir 0,25 ml de ácido fórmico y 1 ml de solución de ninhidrina al 3 por 100. Cerrar herméticamente el tubo e introducirlo en un baño de agua hirviendo durante catorce o quince minutos. Enfriarlo a unos 20 °C de cinco a diez minutos, añadiendo mientras se enfría 5 ml de solución de isopropanol-agua 1:1 (v/v).
A continuación efectuar la lectura de la absorción a 517 nm después de cinco minutos y antes de treinta minutos.
Efectuar un blanco siguiendo el procedimiento anterior, pero usando 0,5 ml de agua destilada en vez de la solución problema.
16.5 Interpretación de resultados.
Calcular el contenido en prolina por comparación con una curva patrón que comprenda concentraciones entre 0,05 y 0,50 milimoles/ml.
16.6 Referencias.
1. C. S. Ough J. of Food Science 34(3), pág. 228 (1969).
ORUJOS, HECES Y LÍAS
1. CONTENIDO ALCOHÓLICO EN ORUJOS, HECES Y LÍAS
1.1 Principio.
Se determina por destilación de la muestra alcalinizada y medida del contenido alcohólico por alcohometría.
1.2 Material y aparatos.
1.2.1 Aparato de destilación.‒Consta de las siguientes partes:
1.2.1.1 Matraz de destilación de 1.000 ml con rodaje esmerilado. Se puede utilizar de boca ancha o de boca estrecha.
1.2.1.2 Columna de rectificación de 20 cm de largo.
1.2.1.3 Disco metálico o de amianto con un orificio de 8 cm de diámetro.
1.2.1.4 Refrigerante de West de 40 cm de longitud con circulación rápida de agua.
1.2.2 Equipo de medida.
1.2.2.1 Alcohómetros.
1.2.2.2 Termómetros.‒Graduados en grados y décimas de grado y comprendiendo el intervalo de 0-30°.
1.2.2.3 Probeta cilíndrica de 36 mm de diámetro y 320 mm de altura.
1.2.3 Granatorio.
1.2.4 Matraz aforado de 200 ml.
1.2.5 Vaso de precipitados.
1.3 Reactivos.
1.3.1 Lechada de cal-solución de 120 g de CaO en 1.000 ml de agua.
1.3.2 Ácido sulfúrico al 10 por 100.
1.4 Procedimiento.
El producto a analizar es vertido en un vaso de precipitados donde es agitado para su homogeneización y al mismo tiempo para favorecer la expulsión de CO2 que pueda contener.
En el caso de orujos, el muestreo se realiza de forma que la muestra sea lo más homogénea posible.
Pesar 200 g de muestra homogeneizada y vaciar en el matraz de destilación añadiendo 200 ml de agua, parte de los cuales se utilizan para enjuagar el vaso que ha contenido la muestra, y a continuación se añade lechada de cal hasta neutralizar en exceso (10 ml aproximadamente).
Destilar a continuación recogiendo 200 ml, o bien las tres cuartas partes de este volumen (150 ml).
Añadir al destilado más gotas de una disolución acuosa de tornasol y comprobamos que el destilado toma color azul, de franca alcalinidad, debida al NH3 que contiene.
Seguidamente, con una pipeta se adiciona ácido sulfúrico al 10 por 100 en cantidad suficiente para que el destilado vire a rojo, añadiendo un poco más (0,5 ml) para que el medio quede francamente ácido.
Completar con agua destilada el contenido de los 200 ml del matraz y se procede a una segunda destilación, como si de un vino se tratase.
El destilado recogido de esta segunda destilación está ya en condiciones para determinar su grado alcohólico por aerometría y efectuar la corrección a 20 °C.
1.5 Expresión de los resultados.
El resultado se puede expresar:
‒ cc de alcohol absoluto/100 g de muestra
1.6 Referencias.
1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des vins O.I.V. 1969, A2 1-19.
2. De Bernardi, P.; García Viana, E. 1969. «Determinación de grado alcohólico de heces y lías». Estación Enológica de Requena.
